荧光素酶 (luciferase) 报告基因系统是一种以荧光素 (luciferin) 为底物来检测荧光素酶活性的报告系统。相比于荧光蛋白，该系统具有灵敏度高，读数结果稳定等优点。近几年，随着生物医药的蓬勃发展，越来越多的药物选择荧光素酶报告基因系统作为生物学活性检测系统。Avelumab（Bavencio）是一个人IgG1抗PD-L1的人源化单克隆抗体，可解除PD-1/PD-L1介导的免疫抑制，促进T细胞攻击肿瘤细胞。Avelumab于2017年3月24日获FDA批准上市，用于成人和12岁以上儿童的转移性默克尔细胞瘤（皮肤癌的一种）的治疗。本文阐述了一种利用CD16A-NFAT-Luc报告基因系统评价Avelumab ADCC效应的方法，该法相较于传统PBMC/NK原代细胞的ADCC检测方法，具有操作更简单，材料更易获得且方法的灵敏度和精密度更高的优势。
1、靶细胞的处理
消化并离心收集PD-L1/CHO， PBS洗涤两遍后用assay medium（RPMI1640）重悬，并将细胞密度调整为1×106 cells/mL，备用。
2、供试品处理
用assay medium将供试品稀释至30 nM，然后再4倍梯度稀释至第8个浓度点，备用。
3、效应细胞处理
离心收集CD16A-NFAT-Luc效应细胞，PBS洗涤两遍后再用assay medium重悬，并将细胞密度调整为5×106cells/mL，备用。
4、孵育
在96孔白色平底板中，分别加入30 μL靶细胞，30 μL上述梯度稀释的供试品，于37℃预孵育30分钟。再加入30 μL效应细胞，混合后放入CO2培养箱中培养5~6 h。
5、检测
预先取出配制好的Bio-Glory萤火虫荧光素酶检测试剂使其恢复至室温，每孔加入90 μL Bio-Glory试剂，静置5min后，用酶标仪收集化学发光信号。
RHINOBIO
酶标仪检测化学发光信号值（RLU），以浓度为横坐标，RLU值为纵坐标，利用SoftMax软件进行四参数拟合，试验结果详见图1。结果表明Avelumab型可诱导明显的ADCC效应，且有良好的量效关系。同时表明该体系可用于抗体类分子ADCC效应的检测。
1、针对不同的靶细胞和效应细胞，需要摸索合适的效靶比以获得较高的信噪比。
2、效应细胞和靶细胞在做实验前均需要用PBS洗涤，以去除FBS对检测的影响。
3、报告基因的表达会随着时间呈现先上升后下降的趋势，需要控制孵育时间，并不是时间越长越好。
瑞诺生物提供多种生物学活性检测配套产品，助力您的药物研发。
货号
产品名称
规格
RA-GL04
Bio-GloryTM One-Step 萤火虫荧光素酶分析试剂盒
50mL
RA-GL05
Bio-OneTM One-Step 萤火虫荧光素酶分析试剂盒
50ML
RA-GL06
Bio-SteadyTM One-Step 萤火虫荧光素酶分析试剂盒
50ML
RA-GL07
Bio-BrightTM One-Step 萤火虫荧光素酶分析试剂盒
50ML
RA-CK01
ADCC Reporter Bioassay, Core Kit
1×1ml
RA-CK16
PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay
2×1ml/支
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电话：18912791908